Découvrez les personnes qui ont conçu et validé notre tout dernier panel ciblé.
Le panel ciblé « Oxysterols » Metabolon a été lancé le 25 octobre 2022, offrant une solution reproductible pour la quantification systématique des oxystérols dans les échantillons de plasma humain. Deirdre Hauser, chercheuse principale chez Metabolon, a dirigé la conception et la validation de ce panel. Voici, selon ses propres mots, comment le panel ciblé « Oxysterols » a vu le jour.
Pourquoi a-t-on choisi les oxystérols pour mettre au point un panel métabolomique ciblé ?
Les oxystérols, qui sont des formes oxydées du cholestérol, constituent des intermédiaires dans la synthèse d'autres métabolites, tels que la vitamine D et les acides biliaires. De plus, de nombreux oxystérols sont des molécules bioactives qui régulent ou modulent certaines voies et réponses, telles que la synthèse des stérols, les réponses inflammatoires et immunitaires, ainsi que les processus de développement. En raison de leur bioactivité, les oxystérols ont été associés à la pathogenèse de maladies telles que le cancer, l'athérosclérose et les maladies neurodégénératives ; cependant, le mécanisme d'action de nombreux oxystérols n'est pas bien compris. Ceci, ajouté au fait que les oxystérols sont présents à de très faibles concentrations, ce qui en fait des composés difficiles à mesurer sur le plan analytique, est la raison pour laquelle nous avons souhaité développer le panel ciblé sur les oxystérols, afin de contribuer à faire avancer les efforts de recherche sur cette classe de composés.
À qui s'adresse le panel ciblé Oxysterols ? À quelles applications ou à quels projets de recherche ?
Le panel ciblé sur les oxystérols est destiné aux chercheurs qui s'intéressent aux maladies associées à une inflammation, à un trouble immunitaire ou au stress oxydatif. Par ailleurs, les chercheurs qui étudient le métabolisme du cholestérol, celui des acides biliaires ou celui de la vitamine D, ainsi que les troubles associés à ces processus, pourraient trouver dans les oxystérols une nouvelle piste pour leurs travaux.
Quels métabolites sont inclus dans le panel ?
Actuellement, le panel comprend 12 métabolites de stérols et d'oxystérols. Les métabolites inclus sont le cholestérol, le lathostérol, le lanostérol, le desmostérol, le 24-hydroxycholestérol, le 27-hydroxycholestérol, le 4β-hydroxycholestérol, le 7-déhydrocholestérol, le 8-déhydrocholestérol, le 5α, 6α-époxycholestérol, le 5α, 6β-dihydroxycholesténal et le 7α, 27-dihydroxycholestérol. Dans ce panel, nous mesurons les métabolites hydrolysés des stérols et des oxystérols, ce qui signifie que nous convertissons les esters conjugués de stérols et d'oxystérols en leur forme libre avant la mesure.
Pourriez-vous nous expliquer votre processus de validation lors du développement du panneau ?
En règle générale, lors du développement d'un nouveau panel, nous déterminons d'abord quels métabolites pourraient intéresser nos clients, puis nous achetons des étalons de référence pour les analytes disponibles dans le commerce. Nous nous procurons également des étalons internes marqués isotopiquement pour chaque analyte, ce qui nous permet de garantir la sélectivité et une quantification cohérente. Si nous ne parvenons pas à trouver de matériel marqué isotopiquement, nous sommes également en mesure, dans certains cas, de synthétiser ces étalons. Nous optimisons ensuite les conditions de spectrométrie de masse afin de garantir la mesure des métabolites. Nous développons ensuite une procédure d'extraction pour séparer les composés d'intérêt de la matrice, sans modifier ni dégrader les métabolites que nous souhaitons mesurer. Cela peut inclure une simple précipitation des protéines, ou si une sensibilité ou une sélectivité supplémentaire est nécessaire, nous pouvons également recourir à des techniques plus spécialisées, telles que l'extraction en phase solide ou liquide-liquide, ou la dérivatisation. Nous préparons des étalons de calibration à des concentrations connues et les soumettons à la même procédure d'extraction que les échantillons afin de déterminer les concentrations exactes des analytes dans le panel. Nous préparons des échantillons de contrôle qualité (CQ) dans la même matrice et les analysons à trois niveaux différents dans chaque lot.
Avant de procéder à la validation, un plan de validation est élaboré et approuvé ; celui-ci détaille les expériences et les critères d'acceptation pour tous les composants. Ces expériences sont définies dans notre procédure opérationnelle standard (SOP) relative à la validation de la méthode d'analyse ciblée. La validation comprend la détermination de la linéarité, de la sensibilité, de l'exactitude, de la précision, de la stabilité et de la récupération des analytes dans la matrice. Au cours de la validation du panel, les performances de la procédure sont évaluées sur différentes plages de concentration des analytes, déterminées à partir de la mesure de plusieurs lots de la matrice appropriée. La validation de chaque panel comprend au moins trois séries d'essais distinctes, avec des données d'exactitude et de précision pour les étalons d'étalonnage et les échantillons de contrôle qualité, qui doivent satisfaire aux critères d'acceptation définis dans le plan de validation. La stabilité des analytes est testée en soumettant les échantillons à différentes températures et à des conditions de congélation-décongélation. La récupération relative est évaluée en surdosant les échantillons de contrôle qualité de la matrice avec des concentrations connues des métabolites et en comparant le résultat à la concentration nominale. Une fois toutes les expériences prévues menées à bien, les données sont présentées sous forme de tableaux, et tous les analytes ayant satisfait aux critères d'acceptation sont considérés comme validés.
Pour quelles applications vous réjouissez-vous le plus de voir ce panneau utilisé ?
L'analyse du cholestérol et des oxystérols trouve de nombreuses applications dans le domaine des maladies neurologiques. Le cerveau contient des concentrations très élevées de cholestérol. Ainsi, les taux d'oxystérols dans le sang peuvent servir de biomarqueurs pour les maladies neurodégénératives, telles que la maladie d'Alzheimer ou la maladie de Huntington.
Le cholestérol et les oxystérols peuvent modifier l'action des récepteurs membranaires, et certaines maladies neurologiques sont dues aux effets d'un métabolisme anormal du cholestérol et des oxystérols sur ces récepteurs, comme c'est le cas pour le syndrome de Smith-Lemli-Optiz.
La neurodégénérescence peut être évaluée de manière systémique à l'aide de biomarqueurs de stérols ou d'oxystérols ; par ailleurs, leurs activités de modulation des récepteurs membranaires peuvent permettre de mieux comprendre les mécanismes de certains troubles neurologiques associés à un métabolisme perturbé du cholestérol et des oxystérols.
Et ensuite ? Y a-t-il d'autres métabolites que vous êtes en train de valider ou que vous comptez inclure ultérieurement ?
Certains hydroxycholestérols n'ont pas donné les résultats escomptés lors de la mise au point et de la validation de notre méthode ; ils n'ont donc pas pu être inclus dans la version actuelle du panel. Nous aimerions pouvoir proposer à l'avenir le 7α-hydroxycholestérol, le 7β-hydroxycholestérol et le 5β, 6β-époxycholestérol, et peut-être même le 7-cétocolestérol, mais cela nécessitera davantage de temps de développement méthodologique, car ces analytes ont tendance à être moins stables.
Si quelqu'un souhaite obtenir plus d'informations sur ce produit, à qui peut-il s'adresser ?
Chaque membre de Metabolon est extrêmement serviable et saura vous orienter vers la personne compétente. Que vous vous rendiez sur la page du panel ciblé « Oxystérols » pour envoyer une demande ou que vous utilisiez notre page « Contactez-nous », toute demande d'informations supplémentaires recevra une réponse dans un délai de quelques jours ouvrables !
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